王不留行探针法PCR鉴定试剂盒

本产品仅供科研，不得做其它用途

更多产品详细信息可向客服免费索取订购。

本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。

4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。

6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7. 本产品只能用于科研

王不留行探针法PCR鉴定试剂盒样品的制备　

【试剂盒组成】

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

定义和原理

PCR 探针法试剂盒是基于聚合酶链式反应（PCR）技术，结合探针来检测特定核酸序列的工具包。其原理是在常规 PCR 基础上，加入了一段能与目标核酸序列特异性结合的荧光标记探针。在 PCR 扩增过程中，当探针与目标序列结合后，通过荧光信号的变化来实时监测 PCR 产物的扩增情况。

主要组成成分

探针：带有荧光基团和淬灭基团，在完整状态下，淬灭基团抑制荧光基团的荧光信号。当探针与目标序列结合并被核酸酶切割后，荧光基团和淬灭基团分离，从而产生荧光信号。

DNA 聚合酶：负责在引物的引导下，将脱氧核苷酸（dNTPs）逐个添加到引物的 3' 端，合成新的 DNA 链。

dNTPs：即脱氧核苷三磷酸，包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP，是合成 DNA 的原料。

反应缓冲液：为 PCR 反应提供适宜的 pH 值、离子强度等环境条件，保证 DNA 聚合酶的活性和反应的顺利进行。

常见类型

TaqMan 探针法试剂盒：TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，其 5' 端标记荧光报告基团，3' 端标记淬灭基团。在 PCR 扩增过程中，Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性会将与目标序列结合的探针切割，使荧光报告基团和淬灭基团分离，荧光信号增强。通过检测荧光信号的强度，可以实时监测 PCR 产物的扩增情况。

分子信标探针法试剂盒：分子信标是一种具有发夹结构的寡核苷酸探针，其两端分别标记荧光报告基团和淬灭基团。在没有目标序列存在时，分子信标呈发夹结构，荧光报告基团和淬灭基团靠近，荧光信号被淬灭。当存在目标序列时，分子信标与目标序列杂交，发夹结构打开，荧光报告基团和淬灭基团分离，产生荧光信号。

2. 样品制备

DNA提取：使用适合的DNA提取试剂he提取待测样品中的DNA，确保DNA的纯度和完整性。

样品处理：样品需在0-4℃条件下处理，避免RNA降解，并在实验后立即检测或储存于-20℃。

3. 反应体系构建

反应管标记：根据实验需求，标记N+9或N+4个PCR管，其中N为样品数量，+9或+4分别用于标准曲线、阴性对照和阳性对照。

加入试剂：

每孔加入25μL反应体系，包括模板DNA、引物、探针、dNTPs、Taq酶等。

阳性对照和阴性对照分别加入不同浓度的标准品或无DNA的溶液。

4. PCR扩增

初始变性：95℃预变性3分钟。

循环扩增：

温度设置：95℃（变性）15秒，60℃（退火）30秒，72℃（延伸）1分钟。

循环次数：通常为40次，每次循环后收集荧光信号。

荧光信号检测：在60℃退火阶段收集FAM通道的荧光信号，实时监控扩增过程。

5. 数据分析

定量分析：

绘制标准曲线：以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，计算待测样品的DNA浓度。

根据待测样品的Ct值推算其浓度。

定性分析：

阴性对照无Ct值或Ct值≥40，阳性对照有典型扩增曲线且Ct值<40，待测样品根据Ct值判断阳性或阴性。

6. 结果验证

必要时进行验证实验：如凝胶电泳检测PCR产物大小，确保实验结果的可靠性。

注意事项

实验环境：实验应在超净工作台或生物安全柜内进行，避免污染。

个人防护：佩戴一次性手套、口罩和无尘工作服，避免直接接触试剂。

试剂保存：所有试剂需避光保存，避免反复冻融。

废弃物处理：实验后废弃物需无害化处理

欢迎新老客户垂询订购：王不留行探针法PCR鉴定试剂盒