禽传染性支气管炎荧光PCR检测试剂盒

本产品仅供科研，不得做其它用途

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本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。

4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。

6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7. 本产品只能用于科研

禽传染性支气管炎荧光PCR检测试剂盒样品的制备　

【试剂盒组成】

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】 ABI7500、罗氏 96/480、安捷伦、伯乐、国产博日、宏石等各种荧光定量 PCR 仪。

【样本要求】

1.血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。

2.肌肉或内脏样品：取少量样品（2～3克）于研钵或匀浆器中研磨，然后将研磨匀浆转入无菌离心管中，3000rpm/min 离心10分钟取上清待检。

3.应避免标本间交叉污染。

4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

使用方法：

一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。

由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入 45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同。

3. 在 6 号管中加入 5μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 5 号管中加入 5μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 4 号管中加入 5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

检验方法的局限性】

1.当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒检出可能会发生假阴性的结果。

2.被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。

3.样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染，则容易得到假阳性结果。

【注意事项】

1.使用本试剂盒的实验室，应严格按照国家有关部分颁布的有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理；

2.为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理；

3.各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染；检测结束后，应立即对工作台清洁；

4.吸取反应液时，应尽量避免产生气泡；上 PCR 仪前，应注意检查各反应管是否盖紧，以免液体蒸发造成结果不准确；

5.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心；

6.试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放；

7.为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记；

8.检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有 10%次氯酸的废物缸内，检测结束的PCR 反应管，切忌开盖，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃；工作台及各种实验用品应定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒；

9.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用；并在有效期内使用。

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