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本产品仅供科研,不得做其它用途
更多产品详细信息可免费向客服索取订购。
本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
3. 产品精心优化且特异性高,引物是根据高度保守区设计,不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。
4. PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。
6. 本产品只能用于定性实验,不能用于定量。
7. 本产品只能用于科研
香菇源性成分PCR试剂盒样品的制备
1. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取反应,多出的两个中一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 牛乳头瘤病毒 PCR 阳性对照(1×10E6 拷贝/μL,本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
2. 用自选方法纯化上述 N+2 个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌提取试剂盒兼容。
电泳分析
1. 取 5-10uL 扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用 1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
2. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为 200bp 左右。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或 PCR 阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。
3. 如果所有样品和 PCR 阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂、设备、程序、操作等),需要重复并排查原因。
4. 如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2 个样品中有扩增产物的判定为阳性,无则判定为阴性。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入 45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。
3. 在 6 号管中加入 5μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 5 号管中加入 5μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 4 号管中加入 5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
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