热稳定无机焦磷酸酶试剂

热稳定无机焦磷酸酶试剂纯化自重组 E. coli 菌株，携带从极度耐热的 Thermococus litoralis 中克隆的无机焦磷酸酶基因。

该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。 P207–4 + H20 →2HP04–2。该酶在100℃加热4h仍然具有100%活性，

因此可用于PCR反应，解除生成的无机焦磷酸盐对PCR的抑制，增强DNA的复制。

组分

组分名称数量

Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (2 U/μl)100 μl/1 ml

活性定义

1单位指标准反应条件下：0.5ml反应体系，50mM Tricine pH8.5，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反应10 钟，每分钟催化

无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

（1） 该酶在多种反应Buffer中均具有活性，通常该酶在tHDA扩增、PCR、测序反应等实验中，可直接接入即可。

（2） 该酶的用量在不同的实验中需要优化，通常在5~50U/ml浓度调整。

（3） 该酶不可以热失活。

热稳定无机焦磷酸酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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