T4 多聚核苷酸激酶试剂

T4 多聚核苷酸激酶试剂能够催化ATP的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的 5’-羟基末端以及3’

-单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶还具有3’磷酸酶活性，将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和

脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该酶经修饰后，其3’磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

组分

组分名称数量

T4 Polynucleotide Kinase (10 U/μl)100 μl

10×T4 PNK Buffer0.5 ml

10mM ATP100 μl

应用

DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化，以便进行连接反应。

DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序

将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´ 磷酸化，制备pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3´ 端

对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记

活性定义

1 单位指 37℃条件下，30 分钟内催化1nmol 酸不溶性[32P] 掺入所需要的酶量。

储存

-20℃可保存2年。

T4 多聚核苷酸激酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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