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2024-11-01详细介绍
Tth UvrD试剂解旋酶来源于耐热细菌,该蛋白具有热稳定条件下3’-5’解旋DNA的能力。据文献报道,该酶在高温的等温扩增中
(thermophilic Helicase- Dependent Amplification,tHDA),可协助聚合酶进行解链,从而完成恒温扩增,其可不依赖于单
链结合蛋白应用于恒温扩增。该酶耐受95℃,在95℃条件下加热10min,仍保留全部活性。本制品为在E.coli中重组表达纯化而
得。
组分
组分名称100 μg
Tth UvrD Helicase (1 μg/μl)100 μl
储存
-20℃可保存3年。
其他注意事项
(1)该酶经功能性验证具有解旋活性,解链5’突出末端dsDNA活性最高,3’突出末端dsDNA稍弱,平端dsDNA最弱。
(2)测试反应条件为, 0.1pmol/ul的dsDNA, 20mM Tris-HCl,pH7.6, 50mM KCl, 10mM Mg2+, 1mM ATP。
(3)该酶不提供反应Buffer,需要根据特定实验自行准备。
(4)更高浓度的酶制品,请来信询问索取。
Tth UvrD试剂恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起
始前,下图为 65 度反应 30min 后。
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