核酸内切酶V (Endonuclease V)试剂

核酸内切酶V (Endonuclease V)试剂来源于E.coli，通过基因工程重组表达获得。该酶为Mg2+依赖的3’-5’核糖核酸外切酶,其可消化

几乎所有线性RNAs底物，但不能消化环状RNA(circular RNA)、套索RNA(lariat RNA)、3’突出端<7nt的双链RNA。

Rnase R核酸外切酶可高效的去除不含二级结构的线性RNA，从而纯化获得环状RNA分子，便于后续RNA-sequencing

等实验研究。

单位定义

在20 mM Tris-HCl（pH7.5），100 mM KCl，0.5 mM Mg2+条件下, 37°C下水解1 μg的poly-r(A)产物所需酶量为1个活性

单位。

组分

名称数量

Rnase R (20 U/μl)25 μl/250 μl

10×Rnase R Buffer1 ml

应用

生物样品中环状RNA的富集

内含子套索序列的分析和鉴定等

环状RNA研究

可变剪接研究

储存

置于-20°C可保存3年，避免反复冻融。

核酸内切酶V (Endonuclease V)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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