Endonuclease IV 试剂

Endonuclease IV 试剂又叫Nfo，来源于E.coli,参与DNA损伤修复。核酸内切酶IV可识别双链DNA分子上的脱嘌呤/脱嘧啶（AP）位点，并切割 AP 位点 5´ 端的第一个磷酸二酯键，产生 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP)。另外该酶还具有3´二酯酶活性，能从 DNA 的 3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸。该酶的最佳底物为AP双链DNA，但对AP单链DNA也有一定活性。

单位定义

一单位指在10µl反应体系中，37°C反应15min，切割1 pmol 含一个AP位点的34mer寡核苷酸双链，所需要的酶量。

酶储存液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

热失活

85°C 20min。

储存

置于-20°C可保存2年，避免反复冻融。

Endonuclease IV 试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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