Exonuclease III试剂

Exonuclease III试剂来源于E.coli，具有3'-5'外切酶活性，它作用于双链 DNA，从 3' OH 末端方向逐步切去单核苷酸；每次酶与底物

结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。该酶的最佳底物为平末端、5'突出末端双链DNA分子

，但也可作用于双链DNA的缺刻处，从3'降解DNA分子，释放5'单核苷酸。对于3'突出末端，尤其是多于4nt的几乎不切割,

 亦不能切割硫代磷酰脂键。核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。另外，

核酸外切酶 III还具有脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性、RnaseH活性和3' 磷酸酶活性。

组分

名称数量

Exonuclease III (100 U/μl)50 μl

10X Exonuclease III Buffer1 ml

应用

非定向巢式缺失

定点突变

链特异性探针的制备

制备用于双脱氧测序的单链底模板

单位定义

50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟 催化E.coli DNA 产生 1 nmol 酸可溶性产物所需要的 量定义为一个活性单位。

1X Exonuclease III Buffer

10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10 mM MgCl2，1 mM DTT。

热失活

70°C 20min。

储存

置于-20°C，可保存3年。

Exonuclease III试剂试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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