Dnase I(Rnase free)试剂

Dnase I(Rnase free)试剂是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。

由于RNase-free DNase I中Protease已几乎被去除，从而提高了该酶在 pH 中性区域的稳定性。

此外Rnase Free DNase I中添加了Rnase Inhibitor，用于抑制RNA样品中残留的RNase核酸酶，

因此可以有效抑制RNA提取过程中Rnase酶对RNA的降解。Stop Buffer终止反应后，可通过一步加热失活DNase I活性。

单位定义

在50 μl体系下，37℃ 10min条件下消化1 μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。

组分

名称数量

*Rnase Free DNase I (2 U/μl)500μl

10×RD Buffer1 ml

10× RD Stop Buffer1 ml

*Rnase Free DNase I (2 U/μl)中含有20U/μl的Rnase Inhibitor，故进行消化试验时不需要再额外添加Rnase Inhibitor。

纯度

2U的本酶和1μg的16S, 23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化

储存

置于-20°C，可保存2年。

使用注意事项

1）通常加热方法即可失活DNase I。如需要去除残留的变性蛋白，可在37°C消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA样品（不进行加热操作）。

2）10× RD Stop Buffer中含有螯合剂用于去除二价阳离子，进行加热失活前，必须加入2 μl 10× RD Stop Buffer并混合均匀，再进行热失活，否则会导致RNA降解。

3）处理完毕的RNA样品进行一步反转录反应时，添加量需要<20%（如20μl的反转录体系中加入量要<4μl）

Dnase I(Rnase free)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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