核酸外切酶I(E.coli)试剂

核酸外切酶I(E.coli)试剂具有从3’-5’方向降解单链 DNA 的外切酶活性，能够逐步释放脱氧核糖核酸5'单磷酸，

并留下完整的5'端二核苷酸。该酶来源于携带有E. coli exo I 基因的质粒，经重组表达纯化而得。Exonuclease I多用于PCR

扩增后降解消化引物，该酶对于双链DNA和磷酰或乙酰基团封闭的3’OH末端DNA链无活性。

单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下，30 分钟内催化释放 10 nmol 的酸溶性核苷释放所需要的酶量。

组分

名称数量

Exonuclease I(20 U/μl)75 μl

10×ExoI Buffer1 ml

应用

从PCR混合物中去除引物

PCR产物测序之前用于在单管中使用大引物进行的PCR诱变反应

从核酸混合物中去除含有3'羟基末端的单链DNA

检测含有3'羟基末端的单链DNA的存在

储存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事项

（1）1×ExoI Buffer：67mM Glycine-KOH pH 9.5，6.7mM MgCl2，10mM 。该酶在常规PCR Buffer中也具有活性。

（2）该酶的最佳反应温度为37°C，80°C 20min可失活。

（3）该酶不能切割双链DNA，因此含有二级结构的单链DNA需要变性后才能消化。

核酸外切酶I(E.coli)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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