RnaseH试剂

RnaseH试剂是一种核糖核酸内切酶，它能够特异性地降解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键，故能降解RNA/DNA杂交链中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。该RNase H酶广泛用于除去杂交到poly(dT)上的 mRNA poly(A)或除去cDNA第二链合成时mRNA。

单位定义

1单位指50μl反应体系中，37℃条件下，20min内从40pmol 长度为25bp的RNA-DNA杂交链中水解出1nmol核酸底物所需的酶量。

储存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事项

（1）1×Rnase H Buffer：75mM KCl，50mM Tris-HCl pH 8.3，5mM MgCl2，10mM DTT。

（2）该酶的最佳反应温度为37°C，65°C 20min使该酶失活。

RnaseH试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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