PBCV DNA连接酶试剂

PBCV DNA连接酶试剂也称为SplintR 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶，它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接，

这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板"或“桥梁"的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远

优于传统的T4 DNA连接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等

众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强

（米氏常数 Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此，在 RNA 检测技术中，PBCV DNA 

连接酶不失为很好选择用酶。组分

组分名称数量

PBCV DNA Ligase(25 U/μl)50μl

10×PBCV Ligase Buffer250μl

活性定义

25°C反应30分钟条件下，使1pmol的DNA:RNA杂交底物连接所需要的酶量定义为1Unit。

反应温度及失活

该酶的最佳反应温度为25度，可在16-37度之间优化，37度可明显提高反应的特异性；该酶在65°C 加热20min即可失活。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

1. 该酶对一价阳离子非常敏感，如NaCl或KCl的浓度应低于50mM。

2. 该酶的反应温度为16~37℃，随着温度的上升酶活性会提高，但此时腺苷化产物也随之增加，最佳温度为25 ℃。

3. 连接效率随着夹板RNA长度的减少而降低，当长度小于等于10nt时，连接效率为零。

PBCV DNA连接酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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