9N 2.0 DNA连接酶试剂

9N 2.0 DNA连接酶试剂（又名9oN DNA Ligase）能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶来源于极度耐热的海底超嗜热古菌（Thermococcus sp.）9°N 菌株中克隆的连接酶基因，在 45℃-70℃ 范围内均有活性。该酶进一步经基因工程基因突变，使得耐受更高的温度，在95℃孵育5min后活性几乎无损失，因此其适用于：

（1）高温条件下，连接DNA链上的切刻位点

（2）适用LCR反应（Ligase Chain Reaction）

（3）适用MLPA反应（Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification）

活性定义

1单位指 20μl反应体系中，50℃条件下，15分钟内能使50%的1pmol的接头片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。

储存

-20℃可保存两年。

9N 2.0 DNA连接酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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