T4 DNA 连接酶试剂

T4 DNA 连接酶试剂可催化相邻DNA 链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶，

不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。

可应用于在粘性末端或平末端连接双链DNA分子，也可应用于修补双链DNA、RNA或DNA RNA杂交体上的缺口。

组分

组分名称D0101

T4 DNA Ligase(200 U/μl)100 μl

10× T4 Ligase Buffer250 μl

活性定义

16°C反应30分钟条件下，使1pmol的粘性末端DNA连接所需要的酶量定义为1Unit。

失活

65°C，10分钟。

储存

-20℃可保存2年。

T4 DNA 连接酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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