T4 DNA Polymerase (exo-)试剂

T4 DNA Polymerase (exo-)试剂是来源于T4噬菌体的DNA聚合酶，又名T4 gp43，在T4噬菌体DNA复制过程中引导先导链和滞后链沿5'-3'

方向延伸。通过对第219个氨基酸进行点突变修饰D219A，使得该酶失去 3'-5' 外切核酸酶的活性，但保留了聚合酶活性，

且该酶的聚合酶活性强于DNA 聚合酶 I。 与 DNA 聚合酶 I 不同，T4 DNA 聚合酶不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。

组分

组分名称250U

T4 DNA Polymerase exo- (5 U/μl)50 μl

10xT4 DNA Pol Buffer1 ml

活性定义

一个活力单位即在37°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

10X T4 DNA Pol Buffer

200 mM Tris-HCl，pH7.9

500 mM NaCl

100 mM MgCl2

5 mM DTT

1 mg/ml BSA

热失活

75°C， 20 min

T4 DNA Polymerase (exo-)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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