Klenow Fragment(exo-)试剂

Klenow Fragment(exo-)试剂是DNA聚合酶I的N末端截短物，它保留了DNA聚合酶活性，但5´-3´ 核酸外切酶活性缺失。该酶进一步经点突变

（D355A，E357A）去除了其 3´-5´的核酸外切酶活性。因此该DNA聚合酶无任何外切酶活性，仅包含了DNA聚合酶活性，

广泛用于标记探针制备、cDNA 第二条链的合成等建库试验。

包装

组分名称数量

Klenow Fragment(exo-) (10 U/μl)100 μl

*10×Klenow Buffer1 ml

*10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50 mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容PCR Buffer和内切酶Buffer。

单位定义

一个活力单位即在37°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

应用

用随机引物制备探针

随机引物法标记

cDNA 第二条链的合成

该酶不能用于产物平端不齐

储存

-20°C可保存3年。

失活

75°C，20min失活。

Klenow Fragment(exo-)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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