3173 DNA Polymerase(5U/ul))试剂

3173 DNA Polymerase(5U/ul))试剂 聚合酶是Taq DNA聚合酶中的一种，其经过基因工程改造的Taq (R660D/F667Y) DNA聚合酶基因。

该DNA聚合酶具有较强的ddNTP的渗入能力，因此其适用于终止法DNA测序或SNP分析。

组分

组分名称数量

Taq FS DNA Polymerase (5 U/μl)100 μl

10×Taq FS PCR Buffer1 ml×2

单位定义

一个活力单位即在在74°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用方法

按下表配制反应液:

Taq FS DNA Polymerase (5 U/μl)               0.25 μl

10×Taq FS PCR Buffer                                  10 μl

dNTP Mixture (2.5 mM each)                         2 μl

*1模板DNA                                                   *X μl

引物F（10 μM）                                            2 μl

引物R（10 μM）                                            2 μl

ddH2O                                                Up to 50 μl

*1模板DNA用量参数(50 μl反应体系):Genomic DNA 100-1000 ng ; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μlPCR扩增循环参数

循环数温度时间

1st Cycle95°C2min

25-35 Cycles95°C20s

Tm20s

72°C1kb/1min

Last Cycle72°C2min

3173 DNA Polymerase(5U/ul))试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。