详细介绍
G5U Plus HiFi PCR Mix试剂G5U Plus High-Fidelity DNA Polymerase, 由分子酶进化平台(in silico Design & invitro Evolution Workflow
筛选获得,其融合Q5和Q5U DNA聚合酶的性能于一体,使其成为一酶多用的全能选手。G5U Plus DNA聚合酶来源于高保真
DNA聚合酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有长片段扩增、高产、快速扩增能力。强压力筛选的外切活性区域,
使其具有超保真性能(与Q5同水平),底物活性中心的改造,使其具有dUTP渗入的能力和扩增含尿嘧模板的能力。
G5U Plus DNA聚合酶具有4kb/min以上的延伸速度,可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。
该酶具有5’-3’的聚合酶活性、强3’-5’的外切酶活性,产物为平末端。
许多具有高保真扩增性能的聚合酶来为 B型 DNA 聚合酶,在遇到 DNA 模板中的尿嘧基时停止复制。
G5U Plus删除了尿嘧结合域,使其能够读取和扩增含有尿嘧的模板,该性能赋予其的“U" 特征。
该特征有两个重要的应用方向:(1)用于超保真扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损 DNA;(
2)在超保真扩增中搭配dUTP和热敏UDG,用于防止 PCR 体系中携带污染。此外,也多用于USER 克隆。
G5U Plus DNA聚合酶是具有热启动功能的版本,由适配体封闭酶活性中心,在反应结束恢复室温后,
适配体可逆的重新封闭聚合酶。其热启动功能确保在25℃以下无活性,高于50℃后迅速恢复100%活性。
热启动功能便于室温建立反应体系、有效的降低低温下的非特异扩增、提高多重超保真扩增效果,使超保真扩增达到最佳。
主要特征
超保真扩增:与Q5 DNA聚合酶同水平的保真性能,是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。
识别dUTP底物:能够读取和扩增含有尿嘧的模板,具有“U" 特征。
防污染扩增:在PCR扩增中可以使用dUTP替代dTTP,建立防污染高保真扩增。
快速扩增:具有4kb/min的扩增能力。
长片段扩增:质粒、λDNA 等简单模板>20 kb,复杂基因组模板>8 kb。
单位定义
一个活力单位即在72°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
储存
(1)酶储存液:10mM Tris-HCl,pH7.6,100mM NaCl,0.05% Tween20, 1mM DTT,0.5mM EDTA,50%甘油。
(2)置于-20°C以下,可保存3年。
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