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2024-11-01详细介绍
花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程,与植物的产量密切相关,通过花粉活力的测定,可了解花粉的可育行,并掌握不育
花粉的形态、生理特征,花粉活力的检测方法常用的有:花粉萌发测定法、染色法、TTC染色法和过氧化物酶检测等
方法。
花粉活力检测试剂盒(I-KI法)的原理是正常成熟的花粉粒具有较强的活力,在适宜的培养条件下能萌发和生长
,显微镜下可以直接观察与计数萌发个数,计算其萌发力,进而确定花粉的活力。该试剂盒仅用于科研领域,
不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
自备材料:
1、蒸馏水
2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管
3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品∶
①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆,4℃ 10000r/min
离心15~20min,留取上清液,-20℃冻存,用于苯丙氨解氨酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定,-20℃冻存,用于苯丙解氨的检测。
③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,4℃ 10000r/min离心15~20min,取上清液,
-20℃冻存,用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸馏水或PAL
Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。
2、PAL加样∶
取96孔板,按照下表设置对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并
注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行孔,
求平均值。
加入物(μl)对照孔测定孔
蒸馏水150100
待测样本5050
PAL Assay Buffer-50
3、PAL检测︰
以对照孔为对照(调零),酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为 A测定0);40℃准确孵育1h,立即加入10μl PAL终止
液终止反应(备选方案),以对照孔为对照调零,酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。
注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤,可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零,酶标仪立即测定290nm处测定
孔的吸光度。
注意事项∶
1、待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、获得上清液为PAL酶液,应尽快检测,亦可-20°℃保存。
3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板,也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿,但应注意比色杯的最小检测体积。
4、每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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