总抗氧化能力(FRAP微板法)

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会

产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、环境污染等也可以诱导活性氧的产生，活性氧产生后可以导致细胞内脂、

蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、

肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的

各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生；一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总

的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力，因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化

能力具有非常重要的生物学意义。

总抗氧化能力(FRAP微板法)即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method，

简称T-AOC Assay Kit，是一种采用ABTS作为显色剂，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、

植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒；ABTS法测定T-AOC的检测原理是

在氧化剂作用下ABTS被氧化成绿色的ABTS?+，在抗氧化物存在时ABTS?+的产生被抑制，可在734nm或405nm测定ABTS?+的

吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相似的抗氧化能力，

可作为其它抗氧化物总抗氧化能力的参考，例如Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其它物质的抗氧化能力可用其抗氧

化能力和Trolox相比的倍数来表示，该试剂盒快捷方便，加入待测样品3~6分钟即可进行吸光度测定，

通常10~20个样品可以在20分钟内检测完毕。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

自备材料：

1、蒸馏水

2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管

3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品∶

①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000r/min

离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苯丙解氨的检测。

③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000r/min离心15~20min，取上清液，

-20℃冻存，用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL

Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。

2、PAL加样∶

取96孔板，按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并

注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）对照孔测定孔

蒸馏水150100

待测样本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL检测︰

以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为   A测定0);40℃准确孵育1h，立即加入10μl PAL终止

液终止反应(备选方案)，以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。

注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定

孔的吸光度。

注意事项∶

1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可-20°℃保存。

3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板，也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿，但应注意比色杯的最小检测体积。

4、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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