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2024-11-01详细介绍
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会
产生活性氧,同时一些环境因子例如紫外照射、环境污染等也可以诱导活性氧的产生,活性氧产生后可以导致细胞内脂、
蛋白和DNA等的氧化损伤,诱发氧化应激(Oxidative stress),继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、
肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等,可以清除体内产生的
各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生;一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总
的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力,因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液,细胞或组织等裂解液中的总抗氧化
能力具有非常重要的生物学意义。
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method,
简称T-AOC Assay Kit,是一种采用ABTS作为显色剂,可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒;ABTS法测定T-AOC的检测原理是
在氧化剂作用下ABTS被氧化成绿色的ABTS?+,在抗氧化物存在时ABTS?+的产生被抑制,可在734nm或405nm测定ABTS?+的
吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox是一种维生素E的类似物,具有和维生素E相似的抗氧化能力,
可作为其它抗氧化物总抗氧化能力的参考,例如Trolox的总抗氧化能力为1,相同浓度情况下,其它物质的抗氧化能力可用其抗氧
化能力和Trolox相比的倍数来表示,该试剂盒快捷方便,加入待测样品3~6分钟即可进行吸光度测定,
通常10~20个样品可以在20分钟内检测完毕。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
自备材料:
1、蒸馏水
2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管
3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板
操作步骤(仅供参考):
1、准备样品∶
①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆,4℃ 10000r/min
离心15~20min,留取上清液,-20℃冻存,用于苯丙氨解氨酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定,-20℃冻存,用于苯丙解氨的检测。
③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,4℃ 10000r/min离心15~20min,取上清液,
-20℃冻存,用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸馏水或PAL
Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。
2、PAL加样∶
取96孔板,按照下表设置对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并
注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行孔,
求平均值。
加入物(μl)对照孔测定孔
蒸馏水150100
待测样本5050
PAL Assay Buffer-50
3、PAL检测︰
以对照孔为对照(调零),酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为 A测定0);40℃准确孵育1h,立即加入10μl PAL终止
液终止反应(备选方案),以对照孔为对照调零,酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。
注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤,可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零,酶标仪立即测定290nm处测定
孔的吸光度。
注意事项∶
1、待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、获得上清液为PAL酶液,应尽快检测,亦可-20°℃保存。
3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板,也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿,但应注意比色杯的最小检测体积。
4、每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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52723P52723pCMV-NPC1L1(human)-mCherry-Neo
52724P52724pmini35S-Rluc-CmR
52725P52725pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA2-CopGFP-Puro
52726P52726pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA2-CopGFP-Puro
52727P52727pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
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