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过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外比色法)

简要描述:过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外比色法),上海雅吉生物科技有限公司登录正版是一家生物企业主营ATCC细胞,细胞系,原代细胞和培养试剂,重组蛋白,ELISA试剂盒、抗体、荧光定量PCR检测试剂盒

  • 产品型号:TE0743
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-11-01
  • 访  问  量:136

详细介绍

过氧化氢酶(Catalase,CAT)又称触酶,是一类以铁卟啉为辅基的结合酶,由四个相同亚单位组成的四聚体酶,共含4分子的亚铁

血红素作为辅基,分子量约为24KD,CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除,可与GSH-Px共同保护巯基酶、

膜蛋白、过氧化氢解离。


过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外比色法)其检测原理是血清或血浆等样本在最佳酶反应条件下,反应后剩余的H2O2

与钼酸铵形成稳定的黄色复合物,其黄色深浅与酶活性成反比,通过酶标仪测定405nm处吸光度,该酶的检测对于研究自由基

代谢平衡、抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值,100T试剂盒可检测46~50个样本。该试剂盒仅用于科研领域,

不适用于临床诊断或其他用途。


操作步骤(仅供参考)

自备材料:

1、蒸馏水

2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管

3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板


操作步骤(仅供参考):

1、准备样品∶

①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆,4℃ 10000r/min

离心15~20min,留取上清液,-20℃冻存,用于苯丙氨解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定,-20℃冻存,用于苯丙解氨的检测。

③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,4℃ 10000r/min离心15~20min,取上清液,

-20℃冻存,用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸馏水或PAL

Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。

2、PAL加样∶

取96孔板,按照下表设置对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并

注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行孔,

求平均值。

加入物(μl)对照孔测定孔

蒸馏水150100

待测样本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL检测︰

以对照孔为对照(调零),酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为   A测定0);40℃准确孵育1h,立即加入10μl PAL终止

液终止反应(备选方案),以对照孔为对照调零,酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。

注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤,可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零,酶标仪立即测定290nm处测定

孔的吸光度。

注意事项∶

1、待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。

2、获得上清液为PAL酶液,应尽快检测,亦可-20°℃保存。

3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板,也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿,但应注意比色杯的最小检测体积。

4、每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。




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