(SOD)检测试剂盒(NBT核黄素比色法)

超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金属辅基的酶，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢

(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶，由于超氧自由基是不稳定的的自由基，寿命极短，SOD活性一般用间接

方法测定，并利用各种呈色反应来测定SOD活力，其中显色剂有NBT(唑蓝四氮)、WST-1、WST-8等。

(SOD)检测试剂盒(NBT核黄素比色法)(NBT核黄素微板法)(Total Superoxide Dismutase Assay Kit with NBT)是一种基于

NBT的光还原反应，所以又称作NBT光还原法，检测原理是在有氧化物质存在下核黄素被光还原，在有氧条件下，被还原的核黄

素极易再氧化产生超氧阴离子自由基(O2.-)，O2.-可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有强吸收，而SOD可清除

超氧阴离子(O2.-)，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明SOD活性愈低，反之酶活性愈高，

据此通过酶标仪比色分析就可以计算出样品中总超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用SOD抑制NBT在光照下的还原作用来

确定酶活性大小，可用于检测植物、组织、细胞、血清或其它样品中SOD活性。该试剂盒仅用于科研领域，

不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

自备材料：

1、蒸馏水

2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管

3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品∶

①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000r/min

离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苯丙解氨的检测。

③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000r/min离心15~20min，取上清液，

-20℃冻存，用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL

Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。

2、PAL加样∶

取96孔板，按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并

注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）对照孔测定孔

蒸馏水150100

待测样本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL检测︰

以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为   A测定0);40℃准确孵育1h，立即加入10μl PAL终止

液终止反应(备选方案)，以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。

注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定

孔的吸光度。

注意事项∶

1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可-20°℃保存。

3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板，也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿，但应注意比色杯的最小检测体积。

4、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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