乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛比色法)

 硝酸还原酶(Nitrate reductase，NR)是一种氧化还原酶，可分为参与硝酸盐同化的同化型还原酶和催化以硝酸盐为活体氧化的

最终电子受休的硝酸盐呼吸异化型(呼吸型)还原酶。硝酸还原酶是植物氮素代谢中氮素同化的关键酶，该酶与作物吸收利用氮肥

有关，对作物的产量和质量有影响，因此可以把硝酸还原酶的活力当作营养诊断、农田施肥或作物育种的生理生化指标。

硝酸还原酶(NR)测定方法可分为活体法和离体法，活体法步骤简，适合快速、多组测定；离体法比较复杂，但重复性好。

乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛比色法)检测原理是硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，其反应如下：

NO3-+NADH+H+→NO2-+NAD++H2O，产生的亚硝酸盐与磺胺及萘胺在酸性条件下定量生成稳定的红色偶氮化合物，

于酶标仪520nm处检测吸光度，由产生的亚硝态氮的量表示硝酸还原酶的活性，一般以单位μg/(goh)表示，

主要用于检测植物样本、血清等中硝酸还原酶活性，尤其适用于离体植物组织硝酸还原酶的活力。该试剂盒仅用于科研领域，

不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

自备材料：

1、蒸馏水

2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管

3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品∶

①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000r/min

离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苯丙解氨的检测。

③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000r/min离心15~20min，取上清液，

-20℃冻存，用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL

Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。

2、PAL加样∶

取96孔板，按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并

注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）对照孔测定孔

蒸馏水150100

待测样本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL检测︰

以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为   A测定0);40℃准确孵育1h，立即加入10μl PAL终止

液终止反应(备选方案)，以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。

注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定

孔的吸光度。

注意事项∶

1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可-20°℃保存。

3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板，也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿，但应注意比色杯的最小检测体积。

4、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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