乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH或LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳

酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳

酸(L)和丙酮S(P)之间的氧化还原反应。其反应公式：乳酸+NAD+→丙酮s+NADH+H+。其中：L→P为正向反应；

P→L为逆向反应。

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)是利用乳酸脱氢酶催化上述正反应，即L-乳酸+NAD+→丙酮S+NADH+H+

，在上述反应过程中乳酸氧化成丙酮S，同时NAD+氧化成NADH，引起340nm处吸光度的升高，其升高速率与样品中LDH活性

呈正比关系，通过分光光度计或自动分析仪检测340nm处吸光度升高速率，通过计算获得乳酸脱氢酶的活性。该LD-L法的优点

是：1、乳酸盐和NAD+底物溶液的稳定性比LD-P法中的

和NADH底物溶液好；2、线性速率反应时间范围较宽；3、重复性比LD-P法和二硝基苯肼法好；4、准确性比二硝基苯肼法好；

5、适用于自动分析仪。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、蒸馏水

2、离心管

3、水浴锅或恒温箱

4、96 孔板、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃

保存 1 个月有效，用于 ALT/GPT 的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存 1 个月有效，

用于 ALT/GPT 的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单

位蛋白重量组织或细胞内的 ALT/GPT 含量。

2、 制作 ALT 标准曲线：取丙酮S标准 1 支，准确加入标准稀释液 1ml，充分混匀，

即配制成丙酮标准(100mmol/L)，4℃保存备用。临用前，按丙酮标准(100mmol/L)：丙

酮S标准稀释液=1：49 的比例混合，即为丙酮标准工作液-丙酮标准(2mmol/L)，以 96

孔板，按下表制备标准曲线，最好设定平行检测孔，求平均值。

混匀，向各管中加入苯肼显色液 20ul，混匀，37℃孵育 20min，加入 ALT 显色基液 200ul，

混匀。室温放置 5min，以蒸馏水调零，酶标仪 505nm 处读取各管吸光度。各管吸光度均减

去"0"号管吸光度，所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。注意：

标准品用分光光度计检测参考值在 0.3~0.9 之间，加入 ALT 显色基液后其颜色依次为黄色至

棕红色，应及时检测，随着时间的延长其颜色会加深，由于检测仪器、操作手法等条件的不

同，参考值范围会有波动。

3、 ALT 加样：按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生

气泡。如果样品中的 ALT 酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

4、 ALT 测定：混匀，室温放置 5min，以蒸馏水调零，酶标仪 505nm 处测定对照管、测定

管的吸光度(即为 A 对照、A 测定)，如无 505nm 可选择 500~520nm。

计算：以系列标准孔活力卡门单位为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，以

(A 测定－A 对照)之差值，从标准曲线查得 ALT 活力卡门单位

参考范围：成年健康人血清 ALT：5~25 卡门单位/ml

注意事项：

1、苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应过滤后使用或弃用。

2、由于赖氏法的特点，在绘制标准曲线时每个点最好做 3 管的重复测定，求出各标准管的

吸光度均值，减去“0"号管吸光度均值，对照赖氏单位绘制标准曲线。

3、血清中 ALT 活性在室温可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 个月。

4、成批样本测定时一般无需每份样本都做自身血清对照，以试剂空白管代替即可。

5、对于超过正常范围的血清样本，应该进行复测，复测时每份样本都应做自身血清对照。

6、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高，因此检测该类样本时应

做自身血清标本对照。

7、当样本的酶活力大于 150 卡门单位时，应将样本进行 5~10 倍稀释后再行测定。

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