氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)

转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，氨基转移酶(ALT)旧称谷丙(GPT)主要存在于肝细胞浆

内，细胞内ALT浓度远高于血清，肝细胞破坏后血清ALT立即迅速升高，因此谷ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的

检测指标。

氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是ALT催化丙氨S与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，

二硝基苯肼与α-酮酸反应生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下二硝基苯腙的吸收光谱有差异，酶标仪检测在500~520nm处差

异最大，以等摩尔浓度计算出的生成量，进而计算酶的活性。100T该检测试剂盒可检测50个样本(不含标准品)，

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、蒸馏水

2、离心管

3、水浴锅或恒温箱

4、96 孔板、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃

保存 1 个月有效，用于 ALT/GPT 的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存 1 个月有效，

用于 ALT/GPT 的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单

位蛋白重量组织或细胞内的 ALT/GPT 含量。

2、 制作 ALT 标准曲线：取丙酮S标准 1 支，准确加入标准稀释液 1ml，充分混匀，

即配制成丙酮标准(100mmol/L)，4℃保存备用。临用前，按丙酮标准(100mmol/L)：丙

酮S标准稀释液=1：49 的比例混合，即为丙酮标准工作液-丙酮标准(2mmol/L)，以 96

孔板，按下表制备标准曲线，最好设定平行检测孔，求平均值。

混匀，向各管中加入苯肼显色液 20ul，混匀，37℃孵育 20min，加入 ALT 显色基液 200ul，

混匀。室温放置 5min，以蒸馏水调零，酶标仪 505nm 处读取各管吸光度。各管吸光度均减

去"0"号管吸光度，所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。注意：

标准品用分光光度计检测参考值在 0.3~0.9 之间，加入 ALT 显色基液后其颜色依次为黄色至

棕红色，应及时检测，随着时间的延长其颜色会加深，由于检测仪器、操作手法等条件的不

同，参考值范围会有波动。

3、 ALT 加样：按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生

气泡。如果样品中的 ALT 酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

4、 ALT 测定：混匀，室温放置 5min，以蒸馏水调零，酶标仪 505nm 处测定对照管、测定

管的吸光度(即为 A 对照、A 测定)，如无 505nm 可选择 500~520nm。

计算：以系列标准孔活力卡门单位为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，以

(A 测定－A 对照)之差值，从标准曲线查得 ALT 活力卡门单位

参考范围：成年健康人血清 ALT：5~25 卡门单位/ml

注意事项：

1、苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应过滤后使用或弃用。

2、由于赖氏法的特点，在绘制标准曲线时每个点最好做 3 管的重复测定，求出各标准管的

吸光度均值，减去“0"号管吸光度均值，对照赖氏单位绘制标准曲线。

3、血清中 ALT 活性在室温可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 个月。

4、成批样本测定时一般无需每份样本都做自身血清对照，以试剂空白管代替即可。

5、对于超过正常范围的血清样本，应该进行复测，复测时每份样本都应做自身血清对照。

6、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高，因此检测该类样本时应

做自身血清标本对照。

7、当样本的酶活力大于 150 卡门单位时，应将样本进行 5~10 倍稀释后再行测定。

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