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2024-11-01详细介绍
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9
.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及
微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及
平滑肌的细胞膜。
(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法,其检测原理是
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成
p-nitrophenol;在碱性条件下p-nitrophenol转变成醌式结构,呈较深的黄色,产物黄色越深说明碱性磷酸酶活性越高,
反之则酶活性越低,通过比色法(酶标仪)测定400~415nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平
,可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域
,不适用于临床诊断或其他用途。
计算:碱性磷酸酶金氏活性单位的定义:在 37℃条件下,100ml 待测样品与显色底物(即 ALP
显色液所含物质)作用 15min,产生 1mg 酚为一个金氏单位。
以系列 Phenol 标准(1~6 号)对应的金氏单位(5、10、20、30、40、50U/L)为横坐标,以相应
的 A 标准(1~6 号)为纵坐标,绘制标准曲线。以 A 测定-A 对照的差值为实际的吸光度,用
该差值与标准曲线进行对比,求出酶活力单位。
参考区间(37℃):
健康成年人 3~13 金氏单位
健康儿童 5~28 金氏单位
注意事项:
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、如果没有酶标仪,也可以使用分光光度计测定,但应注意 96 孔板最大检测体积。
3、所测样品的值高于标准曲线的上限,应稀释样品后重新测定。
4、空白孔如果显红色,说明 ALP 显色液不可用,应丢弃。
5、加入显色基液时应迅速,并且及时混匀,否则显色不充分。
6、如无法检测 510nm,亦可检测 500~530nm 范围内吸光度。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
附录:参考标准曲线范围:测定 Phenol 标准在 5~50U/L 金氏单位时,通过酶标仪 505nm 测
定其吸光度多在 0.1~1.0 之间,标准曲线参考如下:
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