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2024-11-01详细介绍
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9
.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及
微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及
平滑肌的细胞膜。
(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法,其检测原理是
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成
p-nitrophenol;在碱性条件下p-nitrophenol转变成醌式结构,呈较深的黄色,产物黄色越深说明碱性磷酸酶活性越高,
反之则酶活性越低,通过比色法(酶标仪)测定400~415nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平
,可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域
,不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、取内径为8mm的玻璃试管2支,分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。
2、静脉采血1ml,立即取下针头,沿管壁向各试管注入血液0.5ml,立即混匀并启动秒表计时,并置于37℃水浴中。
3、每隔10s轻摇试管一次,观察管内血液流动情况,直至血液凝固。记录血液凝固所需时间,即为ACT。
4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。
计算:参考区间: (1.77±0.76)min
4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品,按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml,如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml。
注意事项:
1、实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于-20°C.
2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷却后的蒸馏水,并盖紧口。
3、TA滴定液为碱性溶液,有腐蚀性,请小心操作。
4、TA标定液容易长菌,宜4℃保存,一旦发现有絮状物请弃用。
5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用,可考虑用0.01~0.05M TA滴定液进行滴定。
6、TA滴定液含量计算公式中,V0最好为3次空白测定的平均值。
7、如果所测样品的浓度过高,应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定,并将稀释倍数带入公式。
8、如果样品颜色较深,滴定终点不易观察,应采用电位滴定法。
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