甘油三酯(TG)检测(GPO-PAP双试剂微板法)

甘油三酯(Triglyceride，TG)又称三酰甘油或三油酸甘油酯，是三分子长链脂肪酸和一分子甘油形成的脂肪分子，是人体内含量

最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成。目前，

检测甘油三脂的常用方法有酶法和化学法。酶法测定具有简便、快捷、微量且试剂稳定等优点，适用于手工和自动化测定。

化学法是使用异丙醇等不同的有机溶剂从血清中抽提出甘油三酯， 分层或者吸附去除磷脂等影响因素，再经皂化、氧化，

由显色反应进行测定。目前的化学法是乙酰丙酮比色法，其中包括吸附抽提法和分溶抽提法。

甘油三酯(TG)检测(GPO-PAP双试剂微板法)其检测原理是组织匀浆液或血清中的甘油三脂经TG抽提液处理后，

甘油三脂被保留在上层，再经皂化生成甘油，后被氧化剂氧化成甲醛，甲醛与乙酰丙酮在铵根离子存在时，

发生缩合反应(Hantgsch反应)，生成带荧光的黄色物质即3,5-二乙酰-1,4-双氢二甲基吡啶，用分光光度计在420nm处进行比色

测定，与相同处理的标准管对比计算其含量。本试剂盒可用于人或动物的血清、血浆、脑脊液等样本中的甘油三脂含量的测定。

本方法所用试剂室温下可保存半年以上，比较稳定，在0.25~11.44mg/ml（0.28~12.93mmol/L）之间有良好的线性关系，

检测范围较宽。本产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、取内径为8mm的玻璃试管2支，分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。

2、静脉采血1ml，立即取下针头，沿管壁向各试管注入血液0.5ml，立即混匀并启动秒表计时，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s轻摇试管一次，观察管内血液流动情况，直至血液凝固。记录血液凝固所需时间，即为ACT。

4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。

计算：参考区间： (1.77±0.76)min

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°C.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

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