铜检测试剂盒(Cuprizone微板法)

铜是人体重要的微量元素，是酶的重要组成部分如铜蓝蛋白(亚铁氧化酶)、超氧化物歧化酶、细胞色素氧化酶等，总含量约为90mg，有90~95%的铜与球蛋白结合，形成铜蓝蛋白；5~10%的铜与清蛋白结合，清蛋白可作为血浆铜的载体，铜的检测方法有分光光度计、原子吸收光谱法、中子活化分析法等。          

铜检测试剂盒(Cuprizone微板法)原理是在酸性介质中与白蛋白结合的铜从白蛋白中解离出来，经沉淀蛋白质后铜离子与Cuprizone络合，形成稳定的蓝色络合物，通过酶标仪测定620nm处吸光度，形成的蓝色与血清、血浆铜成线性关系，与标准品比较，根据公式计算出铜含量，该检测试剂盒在62.8μmol/L以下线性关系良好，特异性高，较为灵敏。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、取内径为8mm的玻璃试管2支，分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。

2、静脉采血1ml，立即取下针头，沿管壁向各试管注入血液0.5ml，立即混匀并启动秒表计时，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s轻摇试管一次，观察管内血液流动情况，直至血液凝固。记录血液凝固所需时间，即为ACT。

4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。

计算：参考区间： (1.77±0.76)min

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°C.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

铜检测试剂盒(Cuprizone微板法

pDC316-MBH-mNeonGreen-CMV-PSENEN(human)-FLAG

pLV3-CMV-CPSF3(human)-3×FLAG-Puro

pCMV-CCR7(human)-3×HA-Neo

pCMV-Prkci(mouse)-HA-Neo

pCMV-EIF2AK2(human)-3×FLAG-Neo

pCMV-USP7(human)-3×FLAG-Neo

pLV3-CMV-Itgb7(mouse)-CopGFP-Puro

pCMV-COL1A1(human)-3×FLAG-Neo

pCMV-EDA2R(human)-2-3×FLAG-Neo

pCMV-Pkm(mouse-opt)-Neo

pCMV-Snap23(mouse)-3×FLAG-Neo

pLV3-U6-NLRC5(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

pLV3-U6-NLRC5(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

pLV3-U6-CXCR3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

pLV3-U6-USP20(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

pCMV-FRAS1(human)-3×FLAG-Neo

pLV3-U6-STC1(human)-shRNA2-EGFP-Puro

pLV3-U6-NR2F1(human)-shRNA2-EGFP-Puro

pLV3-U6-RAD51(human)-shRNA2-Puro

pLV3-U6-STC1(human)-shRNA3-EGFP-Puro

pLV3-U6-CD63(human)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro

pLV3-U6-USP20(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

pLV3-U6-PRKN(human)-shRNA1-EGFP-Puro

pLV3-U6-USP20(human)-shRNA2-CopGFP-Puro