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2024-11-01详细介绍
血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子组成,上述阴离子在在不同的pH环
境下能快速相互转换。在pH7.4血清中两种磷酸根阴离子浓度比例为1:4;在酸中毒环境下二者浓度约为1:1;在碱中毒环
境下二者浓度比例为1:9;在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法,我国卫生部临检中心
推荐的常规方法为钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法。
无机磷试剂盒(钼蓝比色法)是先经提纯蛋白,利用无机磷与钼酸铵结合生成磷钼酸铵,
后者被还原成蓝紫色的复合物,通过酶标仪检测640nm处吸光度,根据公式计算出无机磷含量。本试剂盒仅用
于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、取内径为8mm的玻璃试管2支,分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。
2、静脉采血1ml,立即取下针头,沿管壁向各试管注入血液0.5ml,立即混匀并启动秒表计时,并置于37℃水浴中。
3、每隔10s轻摇试管一次,观察管内血液流动情况,直至血液凝固。记录血液凝固所需时间,即为ACT。
4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。
计算:参考区间: (1.77±0.76)min
4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品,按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml,如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml。
注意事项:
1、实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于-20°C.
2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷却后的蒸馏水,并盖紧口。
3、TA滴定液为碱性溶液,有腐蚀性,请小心操作。
4、TA标定液容易长菌,宜4℃保存,一旦发现有絮状物请弃用。
5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用,可考虑用0.01~0.05M TA滴定液进行滴定。
6、TA滴定液含量计算公式中,V0最好为3次空白测定的平均值。
7、如果所测样品的浓度过高,应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定,并将稀释倍数带入公式。
8、如果样品颜色较深,滴定终点不易观察,应采用电位滴定法。
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