脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合微板法)

脑脊液(Cerebro-Spinal Fluid，CSF)是存在于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的无色透明液体，由脑室中的脉络丛产生

，与血浆和淋巴液的性质相似，正常成年人的脑脊液约100~150ml，弱碱性，不含红细胞；正常脑脊液具有一定的化学成

分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段。

总蛋白(Total Protein，TP)由白蛋白和球蛋白组成，对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，

一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；

2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性，目前常用的检测总蛋白的方法有：

双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。

脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合微板法)其检测原理是在酸性条件下，伊红解离成阴离子型，染料瞌颜色逐渐褪

去，使试剂空白吸光度降低；蛋白质多肽中的残基解离成带有-NH3+基团，与伊红结合成红色蛋白复合物，其吸光度与蛋白浓度呈比例，与同样处理的标准液比较，测得样本中蛋白质的含量，

可用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

1、取内径为8mm的玻璃试管2支，分别加入白陶土-脑磷脂混悬液0.2ml。

2、静脉采血1ml，立即取下针头，沿管壁向各试管注入血液0.5ml，立即混匀并启动秒表计时，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s轻摇试管一次，观察管内血液流动情况，直至血液凝固。记录血液凝固所需时间，即为ACT。

4、取2支试管血液凝固时间的平均值作为ACT 值。

计算：参考区间： (1.77±0.76)min

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。

注意事项:

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20°C.

2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷却后的蒸馏水，并盖紧口。

3、TA滴定液为碱性溶液，有腐蚀性，请小心操作。

4、TA标定液容易长菌，宜4℃保存，一旦发现有絮状物请弃用。

5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用，可考虑用0.01~0.05M  TA滴定液进行滴定。

6、TA滴定液含量计算公式中，V0最好为3次空白测定的平均值。

7、如果所测样品的浓度过高，应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定，并将稀释倍数带入公式。

8、如果样品颜色较深，滴定终点不易观察，应采用电位滴定法。

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