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原卟啉(FEP)检测试剂盒(荧光比色法)后者在紫外线照射下会发出荧光,可通过荧光比色法测定FEP含量,该试剂盒主要用于检测人、动物血液的红细胞内游离
原卟啉(FEP)的含量,反映缺铁性贫血的程度,但应事先或者事后检测相应的红细胞比容。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
三、自备材料:
1、离心管或小试管
2、蒸馏水
3、酶标仪、96孔板
四、操作步骤(仅供参考):
1、配制组织匀浆液(1×)∶取10ml组织匀浆液(3×)加入20ml蒸馏水即成。
2、配制PA Assay Buffer (1x)∶取10ml PA Assay Buffer (1.5×)加入5ml蒸馏水即成。
3、准备样品︰
①血清、尿液及其他体液样品:血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20°C冻存。
②组织样品︰称取1g组织样品置于匀浆器中,再加入1ml组织匀浆液(1x)仔细研磨,振摇提取静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存,用于PA的检测。
③植物材料︰称取1g植物材料置于匀浆器中,再加入1ml组织匀浆液(1×)仔细研磨,振摇提取,静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存,用于PA的检测。
④高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的PA,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,如鸡血清可稀释5~10倍后检测。
4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品,按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml,如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml。
注意事项:
1、实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于-20°C.
2、实验用蒸馏水不能含有二氧化碳,可用新煮沸且冷却后的蒸馏水,并盖紧口。
3、TA滴定液为碱性溶液,有腐蚀性,请小心操作。
4、TA标定液容易长菌,宜4℃保存,一旦发现有絮状物请弃用。
5、果实中含酸量较少时可将TA滴定液适当稀释后使用,可考虑用0.01~0.05M TA滴定液进行滴定。
6、TA滴定液含量计算公式中,V0最好为3次空白测定的平均值。
7、如果所测样品的浓度过高,应用TA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定,并将稀释倍数带入公式。
8、如果样品颜色较深,滴定终点不易观察,应采用电位滴定法。
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