2XRAPA HiFi PCR Mix试剂

2XRAPA HiFi PCR Mix试剂其来源于高保真DNA聚合酶，并加入了Sso7d延伸结合域，能够提高反应速度、保真度和稳定性。该HiFi PCR Mix为单酶制品，不含其它DNA聚合酶，具有超保真扩增性能（~280倍Taq）、长片段扩增能力、高产量等优势。RAPA HiFi DNA聚合酶在保真性方面与Q5 DNA聚合酶相似，在优化的反应缓冲液中，RAPA HiFi PCR Mix在长片段扩增、产量、成功率方面要超过Q5 PCR Mix。使用该酶可轻松扩增8kb的基因组片段，20kb的λ DNA，8kb的cDNA。RAPA HiFi DNA聚合酶具有6kb/min以上的扩增速度。对于常规或GC含量≤ 65%的复杂模板，使用该制品可以进行可靠的、的扩增。对于高GC含量的模板（＞65%），添加5×Q-Solution（Cat. No.: A3002）确保最大的扩增性能。该HiFi PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、3'-5'的强外切酶活性，产物为平末端。

特征

超保真扩增：~280倍Taq的保真性能，是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。 快速扩增：具有6kb/min的扩增能力。 长片段扩增：质粒、λ DNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb，基因组可以有效扩增>8 kb，cDNA可以有效扩增>8kb。

储存

长期储存置于-20°C以下，可保存2年，避免反复冻融；短期使用置于4°C（3个月）保存，一经融化后请放置于4°C，勿再冻存。

反应实例

1. 长片段扩增能力

分别以λDNA、human gDNA、human cDNA为模板，使用RAPA HIFI PCR Mix进行扩增，循环数统一为28 cycles，结果如上图所示，对于不同种类DNA模板的长片段靶基因，RAPA HIFI PCR Mix均有良好的扩增性能。

常见问题及解决方案：

无扩增或产量低 循环数 退火温度 模板DNA纯度和用量 延伸时间 引物用量 引物设计 增加循环数至35~40cycles 以2℃为单位降低退火温度 使用高纯度的模板DNA，使用合适的模板量。 适当增加延伸时间 在0.1μM~0.5μM之间选取合适的引物量 重新设计优化引物 出现杂带或Smear 退火温度 引物浓度 循环数 模板DNA使用量 引物 以2℃为单位提高退火温度 降低引物浓度至0.2μM 降低循环数至25~28cycles 使用合适的模板量，不要过多使用 重新设计优化引物

2XRAPA HiFi PCR Mix试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 30min 后。

应用实例2：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例3： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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A3828-01Bst 4.0 LS Bead(Low Salt)

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A3828-01RBst 4.0 LowSalt Red Bead

A3824-02Bst 4.0 Basic Mix (液体预混)

A3828-02Bst 4.0 Basic Bead

A3824-03Bst 4.0 SYBR Green Mix

A3828-03Bst 4.0 SYBR Green Bead

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