HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead试剂

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead试剂该制品为全体系冻干微球制品，包含了 HotStart

Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶、Helicaser、dNTP、Mg2+、反

应缓冲、L-HNB 变色指示剂(Leuco-HNB, 隐色 HNB 染

料)，其它稳定剂。

Bst4.2 具有以下性能：（1）Bst 4.2 全系包含热启动

Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>95%,

在>60℃时 1min 内释放酶活。该特性利于室温建立反

应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；（2）反

应温度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高

扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分；（3）全系

包含 Helicaser，因此，允许在不使用 F3/B3 引物的情况下

进行 LAMP 扩增（easy LAMP），并允许 FIP/BIP 的引物

用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增

均一性大幅提升。

制品中的 L-HNB 染料在反应起始前与 Mg2+结合产

生深紫罗兰色，随着 LAMP 反应的进行，产生的 PPi（无

机焦磷酸盐）结合体系中的 Mg2+，使得 L-HNB 显示出

淡绿色。

(L-HNB-Mg2+复合物) -> (PPi-Mg2+)+ (L-HNB)

 深紫罗兰色 淡绿色

名 称 100T

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 100 个

储存：-20℃干燥密封保存 24 个月；室温（25℃）密封保

存 12 个月。避免受潮。

特殊说明：

（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 扩增时

的推荐反应温度为 65-70℃，最佳反应温度为 70℃。因此

其可替代 HaiGene 的 Bst4.0 系列，用于标准 LAMP

的扩增。

（2） 由于 Helicaser 的反应温度为 70℃，因此在进行

eLAMP 扩增时，反应温度为 70℃。

（3）制品中包含高浓度的盐组分，使用时做好个人防护，

防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入，一旦接

触或吸入，请用大量的清水冲洗。

（4）防止气溶胶污染，尽可能进行分区操作。

1. 标准 LAMP 和 eLAMP 扩增的区别

本试剂既可以用于标准 LAMP 扩增，也可以用于 eLAMP

扩增。

1.1 10x 标准 LAMP Primer Mix

FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each

1.2 10xeLAMP Primer Mix

FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each

注意：eLAMP（easy LAMP）为去除 F3/B3 引物的方法，

为 Bst4.2 系列专用的使用策略，对于大多数引物组，在

Helicaser 的加持下，扩增速度几乎不受影响。如引物扩

增效率低，可提高 FIP/BIP 浓度到 12~16 μM。

1.3 扩增温度不同

标准 LAMP 扩增 eLAMP 扩增

65-70°C 均可 70°C 反应

2. 配制 LAMP 反应体系

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 1 个

10x Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到总体积 25 μl

反应体系配好后，置于 65-70°C 反应 20~30min，反应完

毕后观察颜色，紫色为阴性，绿色为阳性扩增。

注意事项：

（1）本制品在 1x 浓度情况下，对如下试剂的耐受度，

Tris-HCl（pH8.0）≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%

≦1%； EDTA(pH8.0) ≦20 μM； 肝素≦0.5 IU/ml。

（2）L-HNB 是还原状态下的染料，任何强氧化剂（H2O2、

次氯酸钠等）均会破坏 L-HNB 的结构，从而直接导致试

剂变为深蓝绿色。

恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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