HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase试剂

HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase试剂经酶电子重构架和进化

筛选（in silico Design & invitro Evolution），其为 Bst 3.0

的升级品，用于 DNA 的 LAMP 扩增。

性能提升包括：（1）Bst 3.2 包含热启动 Aptamer，

该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>90%,在>60℃时

1min 内释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，

并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；（2）反应温度提

升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高扩增特异

性，并使得粗样品核酸释放更加充分；（3）包含 Helicaser，

因此，允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进行 eLAMP 扩

增（easy LAMP），并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。

这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提

升。

名 称 1600 U 16 KU

HotStart Bst 3.2（16U/μl） 100 μl 1 ml

10xIso Buffer4.2 (Mg2+ free) 1 ml 20 ml

100mM Mg2+ 1 ml 20 ml

注意： HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase（16U/μl）与

10xIso Buffer4.2 均不含有甘油，可用于冻干体系的建立。

储存：长期保存请置于-20℃以下（18 个月有效）；制品

反复冻融 10 次不影响性能，但应避免反复冻融；制品一

经融化推荐置于 2-8℃保存，在此条件下制品稳定储存 1

个月。

其它说明：

（1） Bst 4.2 & 3.2 Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的

推荐反应温度为 70℃。由于 Helicaser 的反应温度为

70℃，因此该酶在 65℃扩增时，性能会大幅下降。

（2）制品中包含高浓度的盐组分，使用时做好个人防护，

防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入，一旦接

触或吸入，请用大量的清水冲洗。

（3）防止气溶胶污染，尽可能进行分区操作。

1. 10xLAMP Primer Mix 的配制

标准 LAMP eLAMP

FIP/BIP 16 µM each 8~16 µM each

LF/LB 4~8 µM each 4~8 µM each

F3/B3 2 µM each 非必须

注意：eLAMP（easy LAMP）为去除 F3/B3 引物的方法，

为 Bst4.2-3.2 系列专用的使用策略，对于大多数引物组，

在 Helicaser 的加持下，扩增速度几乎不受影响。

2. 配制 LAMP 反应体系

10xIso Buffer4.2(Mg2+ free) 2.5 μl

100 mM Mg2+

 1.5 μl

dNTP Mixture（10 mM each） 3 μl

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

HotStart Bst 3.2（16U/μl） 0.25-0.5 μl

模板 DNA X μl

ddH2O 到总体积 25 μl

注意：关于 Bst 酶的用量，对于绝大多数的 LAMP 扩增

来讲，0.16-0.32U/µl 的浓度，均可获得理想的扩增结果，

必要条件下进行其它调整。

3. 扩增反应

反应体系配好后，置于 70°C 反应 20~40min。

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