Bst 4.0 Basic Bead试剂

Bst 4.0 Basic Bead试剂为全体系冻干微球制品，内含恒温扩增所用

的反应缓冲液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶

等，其不包含任何染料，使用时只需要加入引物、模板即

可进行核酸恒温扩增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依

赖于 RNA 模板的聚合酶活性（逆转录），还具有依赖于

DNA 的聚合酶活性，因此无论 DNA 或 RNA 样本均可使

用该制品进行恒温扩增。该制品是进行 LAMP 及

RT-LAMP 扩增反应的试剂。

本制品不包含任何显色染料，可自行搭配相关染料

或检测手段进行 LAMP 反应，包括搭配 OG 染料管进行

橙绿变色、搭配标记 Oligo 进行试纸条检测、搭配荧光染

料进行荧光检测、搭配 Molecular Beacon 探针进行荧光

检测等方法。

货 号 名 称 规格

A3828-02 Bst4.0 Basic Bead 100 个

储存：-20℃保存 2 年；室温（25℃）保存>6 个月。

使用方法：（进行 LAMP 橙绿变色扩增）：

1. 关于 OG 橙绿变色管(货号：A3828-21)说明：橙绿变

色染料（OG Dye）以烘干的形式预加在8联管盖上。LAMP

反应完毕后，将 0.2ml EP 管颠倒溶解 OG 染料后。LAMP 

的反应产物将与 OG 染料形成绿色肉眼可见变色反应（阳

性），而未扩增的 EP 管为深橙色（阴性）。本试剂管常温

长期保存。

2. 配制变色 LAMP 反应体系

在 OG 染料管（0.2ml EP）反应管中加入下述试剂

Bst4.0 Basic Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到总体积 25 μl

10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、

LoopF/B 分别为 4~8 μM、F3/B3 分别为 2 μM。

注意：全部试剂加入完毕后，轻弹 EP 管底部后，再盖上 OG 橙

绿变色管（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖

上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反应液中将会终止 LAMP

反应）。

3. 反应体系配好后，置于 65°C 进行反应 15~30min。（扩

增良好的引物组合，通常 20min 即可变色，一般不超过

30min）。

4. 观察结果：反应结束后，从加热装置中将反应管取出，

室温 2min，使整个反应管冷却下来。再次用力将反应管

盖压紧，以防止液体泄露。将反应 EP 管倒置，并手腕轻

甩，反应液浸泡 EP 管盖上的 OG 染料，静置 1min（中

间可轻弹 1-2 次，以加速溶解 OG 染料）。再将 EP 反应

管正置，并轻甩反应液到 EP 管底部，此时扩增样品将变

为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙

色。

注意：（1）观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，

以防止污染操作台。（2）尽管 HaiGene 选取的为高密封

性的 EP 管，但也时有 EP 管发生液体泄露。在反应管倒

置时，可用纸巾包裹 EP 管，一旦发生泄露，丢弃纸巾，

防止台面污染。（3）整个操作过程，佩戴手套、口罩等个

人防护用品。

注意事项：

（1）关于矿物油的使用，在配制完 LAMP 反应体系后，

可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，以减少气溶胶的污

染。矿物油并不影响 OG 染料的溶解。

（2）在使用其它荧光染料时，使用浓度可自行优化，通

常来讲，参考供应商提供浓度的 0.25~0.8x，过高浓度的

染料可能导致扩增失败。

（3）本试剂不支持，浊度、pH 变色、HNB 变色反应，

请勿尝试。

（4）关于 LAMP 成品试剂的建议， Bst 4.0 Basic Bead

冻干球和 OG 橙绿变色管均为室温稳定状态，可长期保

存。将扩增引物加入到 OG 橙绿变色管底部，于 70°C 烘

干，再加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂。

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