详细介绍
Bst 4.0 Basic Mix (液体预混)试剂为单一组分的 MasterMix(2 倍浓度),包含了
反应缓冲液、Mg
2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,
使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst
4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依赖于 RNA 模板的聚合酶活性
(逆转录),还具有依赖于 DNA 的聚合酶活性,因此无论
DNA 或 RNA 样本均可使用该制品进行高效的恒温扩增。该
制品是进行 LAMP 及 RT-LAMP 扩增反应的试剂。优化
的反应体系,确保快速的完成检测试剂的反应体系建立。
该系列产品不包含任何其它辅助染料,在 LAMP 的扩增
搭配 OG 橙绿变色管进行可视化变色反应。除此外,该制品
还可以用于其它恒温扩增实验,包括 CPA、SMAP 等。
组分
货 号 名 称 规格
A3824-02 2xBst 4.0 Basic Mix 1ml
储存:长期保存制品于-20℃,保存 2 年。
使用实例(以 LAMP OG 橙绿变色为例)
橙绿变色染料(OG Dye)以冻干的形式预加在 8 联管盖
上(A3821)。在 LAMP 反应完毕后(在反应完毕前,务
必不能将管盖上染料混入反应液中),将 0.2ml EP 管颠倒
溶解 OG 染料后。LAMP 的反应产物将与 OG 染料形成强
烈的绿色肉眼可见变色反应(阳性),而未发生扩增的 EP
管为深橙色(阴性)。
(1)配制反应体系
在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 浓度:FIP/BIP 分别为 16 μM、
LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM
全部试剂加入完毕后,轻弹 EP 管底部后,再盖上 OG 橙绿
变色管(盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置,以防止将
管盖上的 OG 染料溶解,OG 染料一旦混入反应液中
将会终止 LAMP 反应)。
实验 LAMP Primer Mix 分别采用 1、1.5、2 μl,以阴
性不变色,阳性样品正常变色为标准,作为后续测试用量。
(2)反应体系配好后,置于 60~68°C(实验采用
65°C)进行反应 20~45min。(扩增良好的引物组合,通
常 25min 即可变色,一般不超过 45min,实验设置
20、25、30、45min)。
(3)观察结果:观察结果时,尽可能不要与配制反应空
间共用,以防止污染操作台。将反应 EP 管倒置,并手腕
轻甩,反应液浸泡 EP 管盖上的 OG 染料,静置 30s。再
将 EP 反应管正置,并轻甩反应液到 EP 管底部,此时扩
增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色,而阴性未发生扩增的管
将为深橙色。
注意事项
1. 在用于其它恒温扩增反应时(如 CPA、SMAP 等),
可参考如上策略进行使用,反应时间可能会需要调整。
2. 关于矿物油的使用,在配制完 LAMP 反应体系后,可
加入一滴矿物油覆盖于反应液上部,以减少气溶胶的污
染。
3. 鉴于特殊的生产工艺,HaiGene 全系恒温扩增 Mix 系
列均不能进行浊度分析。
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