Bst 4.0 LowSalt Red Bead试剂

Bst 4.0 LowSalt Red Bead试剂为全体系冻干微球制品，内含恒温扩增所用

的低缓冲盐（Low Salt）、Mg

2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA

聚合酶、红黄 pH 变色染料。由于 LAMP 在反应时会产生

大量的 H+，导致反应体系 pH 下降，因此，低缓冲盐体

系条件下，可搭配 pH 敏感染料实现可视化检测 LAMP 检

测。该制品中包含低浓度的 Tris（pH8.8）缓冲盐。

货 号 名 称 规格

A3828-01R Bst 4.0 LS Red Bead 100 个

储存：-20℃保存 2 年；室温（25℃）保存>6 个月。

使用实例：

1. 配制反应体系

Bst 4.0 LS Red Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到液体总量 25 μl

2. 盖上管盖，置于 65°C 进行反应 20~30min。 肉眼观

察结果，黄色为阳性，红色为阴性。

3. 10xLAMP Primer Mix 的配制，FIP/BIP 分别为 16 μM、

LoopF/B 分别为 4~8 μM、F3/B3 分别为 2 μM。引物的稀

释液均使用 ddH2O（pH8.0-9.0），不能使用含有 Tris 缓

冲盐系统。由于该变色方法对 pH 敏感，多数情况下引物

溶解后成酸性，因此在 10x 引物中加入终浓度 1 mM

NaOH 使引物恢复到中性 pH（~8.5），注意 NaOH 需新

鲜配制，可配制成 50-100 mM 浓度使用。

注意事项：

（1）红黄变色反应依赖于反应体系中 pH 的变化来实现，

因此模板中 Tris 盐、NaOH 等成分对反应有至关重要的

影响。在采用核酸纯化的样本检测时，推荐使用 ddH2O

进行洗脱。

（2）关于 DEPC 水使用的特殊说明：由于 DEPC 处理过

的 ddH2O 显示很强的酸性，会直接导致溶解后的冻干球

成黄色。所以 DEPC 处理过的 H2O 必须经 NaOH 溶液调

整 pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我们推荐直接使用，水机

制备的 18.2Ω H2O，不影响 RNA 样本的扩增。

（3）在对粗制样本进行检测时，最佳的粗制样本为拭孖

样本，拭孖样本经 ddH2O 浸泡后，可以直接使用浸泡液

作为模板进行扩增，无需核酸纯化步骤。

（4）关于 LAMP 成品试剂的建议， Bst 4.0 LS 冻干球

为室温稳定状态，可长期保存。将扩增引物于 70°C 烘干，

再加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂。

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