Bst 4.0 LS Bead(Low Salt)试剂

Bst 4.0 LS Bead(Low Salt)试剂该制品为单一组分的 Mix（2.5 倍浓度），包含了低

浓度缓冲盐（Low Salt）、Mg

2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA

聚合酶等，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒

温扩增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依赖于 RNA 模板

的聚合酶活性（逆转录），还具有依赖于 DNA 的聚合酶活

性，因此无论 DNA 或 RNA 样本均可使用该制品进行恒

温扩增。

由于 LAMP 在反应时会产生大量的 H+，导致反应体

系 pH 下降（通常由 pH8.8，下降到 7.2 以下），因此，低

缓冲盐体系条件下，可搭配 pH 敏感染料实现可视化检测

LAMP 检测。该制品中包含低浓度 Tris（pH8.8）缓冲盐，

在搭配 pH 敏感染料的情况下，可进行变色 LAMP 扩增。

除此外，本试剂中不含有甘油，可用于建立冻干体系。

货 号 名 称 规格

A3824-01 2.5xBst4.0 LowSalt Mix 1 ml

储存：-20℃保存 1 年；-80℃保存 2 年；短期使用放置于

2-8℃，保存 1 个月。反复冻融 10 次，不影响使用。如有

白色沉淀，于 37℃水浴放置 10min 后溶解沉淀，不影响

使用。

使用实例（以 LAMP 红黄变色扩增为例）：

1. 搭配使用红色 pH 指示染料（货号：A3828-23），进行

LAMP 变色反应。

2. 配制反应体系

2.5xBst4.0 LowSalt Mix 10 μl

10xRed pH Dye 2.5 μl

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到总体积 25 μl

3. 盖上管盖，置于 65°C 进行反应 20~30min。 肉眼观

察结果，黄色为阳性，红色为阴性。

4. 10xLAMP Primer Mix 的配制，FIP/BIP 分别为 16 μM、

LoopF/B 分别为 4~8 μM、F3/B3 分别为 2 μM。引物的稀

释液均使用 ddH2O（pH8.0-9.0），不能使用含有 Tris 缓

冲盐系统。由于该变色方法对 pH 敏感，多数情况下引物

溶解后成酸性，因此在 10x 引物中加入终浓度 1 mM

NaOH 使引物恢复到中性 pH（~8.5），注意 NaOH 需新

鲜配制，可配制成 50-100 mM 浓度使用。

其它注意事项：

（1）该试剂对影响 pH 的缓冲盐敏感，因此模板中 Tris

盐、NaOH 等成分对反应有至关重要的影响。在采用核酸

纯化的样本检测时，推荐使用 ddH2O 进行洗脱。

（2）在使用粗制样本时建议使用 ddH2O 保存的样本进行

检测。在对粗制样本进行检测时，最佳的粗制样本为拭孖

样本，拭孖样本经 ddH2O 浸泡后，可以直接使用浸泡液

作为模板进行扩增，无需核酸纯化步骤。

（3）关于 DEPC 水使用的特殊说明：由于 DEPC 处理过

的 ddH2O 显示很强的酸性，会直接导致反应体系变为黄

色。所以 DEPC 处理过的 H2O 必须经 NaOH 溶液调整

pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我们推荐直接使用，水机制

备的 18.2ΩH2O，不影响 RNA 样本的扩增。

（4）该试剂中不含有甘油组分，因此具有冻干经验的人

员可进行冻干试剂的开发。

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