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HotStart Bst4.2聚合酶(16U/ul)无甘油试剂

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  • 产品型号:A3831-00
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-10-31
  • 访  问  量:217

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详细介绍

HotStart Bst4.2聚合酶(16U/ul)无甘油试剂 经酶电子重构架和

进化筛选(in silico Design & invitro Evolution),其为 Bst

4.0 的升级品,通用于 DNA 或 RNA 的 LAMP 或 RT-LAMP

扩增。

性能提升包括:(1)Bst 4.2 包含热启动 Aptamer,

该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>90%,在>60℃

时 1min 内释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,

并大幅降低了低温条件下的非特异扩增;(2)反应温度提

升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高扩增特异

性,并使得粗样品核酸释放更加充分;(3)全系包含

Helicaser,因此,允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进

行 eLAMP 扩增(easy LAMP),并允许 FIP/BIP 的引物

用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增,并使得扩增

均一性大幅提升。

名 称 1600 U 16 KU

HotStart Bst 4.2(16U/μl) 100 μl 1 ml

10xIsoBuffer4.2 (Mg2+ free) 1 ml 20 ml

100mM Mg2+ 1 ml 20 ml

注意: HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(16U/μl)

与 10xIso Buffer4.2 均不含有甘油,可用于冻干体系的建

立。

储存:长期保存请置于-20℃以下(18 个月有效);制品

反复冻融 10 次不影响性能,但应避免反复冻融;制品一

经融化推荐置于 2-8℃保存,在此条件下制品稳定储存 1

个月。

其它说明:

(1) Bst 4.2 & 3.2 Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的

推荐反应温度为 70℃。由于 Helicaser 的反应温度为

70℃,因此该酶在 65℃扩增时,性能会大幅下降。

(2)制品中包含高浓度的盐组分,使用时做好个人防护,

防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入,一旦接

触或吸入,请用大量的清水冲洗。

(3)防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。

1. 10xLAMP Primer Mix 的配制

标准 LAMP eLAMP

FIP/BIP 16 µM each 8~16 µM each

LF/LB 4~8 µM each 4~8 µM each

F3/B3 2 µM each 非必须

注意:eLAMP(easy LAMP)为去除 F3/B3 引物的方法,

为 Bst4.2-3.2 系列专用的使用策略,对于大多数引物组,

在 Helicaser 的加持下,扩增速度几乎不受影响。

2. 配制 LAMP 反应体系

10xIsoBuffer4.2(Mg2+ free) 2.5 μl

100 mM Mg2+

 1.5 μl

dNTP Mixture(10 mM each) 3 μl

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

HotStart Bst 4.2(16U/μl) 0.25-0.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到总体积 25 μl

HotStart Bst4.2聚合酶(16U/ul)无甘油试剂注意:关于 Bst 酶的用量,对于绝大多数的 LAMP 扩增

来讲,0.16-0.32U/µl 的浓度,均可获得理想的扩增结果,

必要条件下进行其它调整。

3. 扩增反应

反应体系配好后,置于 70°C 反应 20~40min。


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