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细胞名称:A2780人卵巢癌细胞ATCC
细胞代次:P4
细胞规格:T25瓶(包邮)/2冷冻管(需加干冰运输费)
细胞冻存:无血清冻存液
细胞传代:第一次建议1:2
细胞收到后处理
培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(最好40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。(注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松,传代后建议一瓶用原瓶的培养基,另外一瓶用自己配的培养基,以便进行对比培养)
培养步骤
细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的培养液收集至离心管中,留5ml培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养,传代具体步骤如下细胞传代:
A1、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
A2、悬浮细胞冻存:
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,将T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中1000rpm
离心5min;
2、弃上清,沉淀细胞加入1ml/支的上海雅吉生物科技有限公司登录正版无血清冻存液(C7001),混匀后加入冻存管中。(如:冻一支,加入 1ml 无血清冻存液即可)
3、将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要将细胞转入液氮罐中,需在-80℃冰箱存
放 24 小时以上。
B1、对于贴壁细胞,传代可参考如下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,使之脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的培养基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
B2、贴壁细胞冻存:
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;
3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的上海雅吉生物科技有限公司登录正版无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。
细胞复苏:
1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4、第二天,换用新鲜培养基继续培养。
注意事项:有些细胞比较特殊,如贴壁不牢,在运输过程中发生容易细胞脱落,这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管,1000rpm离心5min,收集上清作过渡培养(后期对比培养),沉淀加入消化液1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化1-2分钟后,加5ml培养基终止反应。再离心,弃上清,加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
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