支原体污染处理技巧

细胞增殖速度怎么变得这么慢了？细胞发生病变，出现细胞变圆、从培养瓶壁脱落又是什么情况？要疯了，培养细胞怎么就这么难呢~实验过程中存在的“幽灵"，即使是经验丰富的老研究员也不得不面对，没错，它就是支原体感染。

支原体感染的威胁

支原体感染率高达63%，这也使得在细胞培养过程中“支原体污染"问题变成全球性，只要提及支原体污染，研究员往往都会陷入困惑。

它是一种类似细菌但不具有细胞壁的原核微生物，直径在 50-300 nm，可轻松通过0.22um滤膜混入培养系统中，普通的抗生素（如培养细胞常用的双抗）对它不起作用。

而且细胞培养物被支原体污染后往往没有明显的迹象，不像细菌或真菌污染有肉眼可见的变化，甚至细胞本身仍能在一段时间内继续维持正常的形态和增殖速率。

这些特点给我们判断和处理支原体污染带来了一定的麻烦。

1. 可能导致实验结果不准确，因为支原体会与培养基中的其他成分相互作用，影响其他微生物的生长，从而干扰实验结果的收集和分析。

2. 支原体污染可能会对实验设备和仪器造成损害，尤其是对实验室的生物安全柜和其他相关设备，因为支原体会在其上生长并形成菌膜，影响设备的正常运行。如果支原体数量较少，可能不会对测序结果产生明显影响。

3. 如果支原体数量较多，它们可能会在测序过程中影响样本的质量，从而导致测序结果不准确。此外，支原体污染可能会导致样本中的序列 reads 数量减少，从而影响序列组装和基因表达分析等后续分析结果。

因此，在进行测序前，应该采取适当的措施来避免和减少支原体污染，如使用无菌技术、严格控制实验室环境、使用高质量的试剂和仪器等。如果已经出现了支原体污染，应该及时检测和处理，以减少对测序结果的影响。

支原体检测方式

对此我们并非手足无措，通过严密的消毒措施和合理的实验室管理，我们可以有效预防支原体感染，保障研究的顺利进行。有鉴于支原体污染对细胞生物学实验的重要负面影响，定期检测细胞是否被支原体污染成为了很多实验室的必然选项。

常见的支原体检测技术包括：分离培养法，DNA荧光染色检测法等等，但这里更推荐使用等温扩增法。其中分离培养法和DNA应该染色法操作难度较高，而等温扩增法作用浓度低，细胞毒性小，使用方便，即拆即用，只要添加到支原体污染的培养细胞中孵化一周即可。