ATCC细胞实验操作指南

ATCC细胞操作指南

收到细胞的注意事项

　　冻存的ATCC细胞株和杂交瘤细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到冻存细胞后，可以立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DMSO）后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐存储

。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低，达不到-130℃，细胞活力会迅速下降。

　　产品说明书和质检报告（COA）

　　ATCC每个细胞株都有一份产品说明书（product sheet），其中包含细胞株的信息和详细的操作指南。细胞株的所有详细介绍可以在ATCC网站找到，产品说明书和COA也可以从ATCC网站下载。

　　冻存细胞的复苏和培养

　　1.先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。

　　2.小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，大约短于2分钟或待最后一块小冰晶体刚融化，就应将细胞冻存管取出水浴。

　　3.在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用无菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。

　　4.小心拧开冻存管的顶部，将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟(125×g),小心吸去上清液以去除抗冻剂(二甲基亚砜)，避免丢失细胞沉淀。

将细胞沉淀重悬于配好的培养基中

。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀的分布。

生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。ATCC网站有各个细胞株的具体生长状况及培养方法记载。

　　5.将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37℃,二氧化碳浓度5%的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况。

　　为了确保细胞活力、遗传基因型稳定和表型的稳定，细胞株的培养需要保持在对数期。这意味着需要定期对细胞进行传代。并且注意在细胞进入生长平台期之前，

即单层细胞100%汇合长满前或悬浮细胞达到其推荐的最大细胞密度之前，要进行细胞传代。监测细胞生长和绘制每个细胞株的生长曲线都有助于确定细胞株的生长特性。