胰酶消化步骤以及注意事项

胰酶消化步骤以及注意事项

常规细胞培养实验过程中，贴壁细胞的传代培养、冻存保种，都离不开胰酶消化，如何将细胞完好的消化下来，则依赖于对胰酶的优先选择以及操作手法。

01关于胰酶

胰酶全称胰蛋白酶（Trypsin），是胰脏中提取的一种丝氨酸蛋白水解酶，主要作用是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，改变细胞间的连接，使贴壁细胞从瓶壁上脱落并分离单个的细胞。

消化步骤

01去掉培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

02加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据胰酶效率差异可以增加或减少用量。在室温下放置30秒至2分钟（不同的细胞的消化时间也不同）

03肉眼观察瓶壁由半透明（细胞单层连接成片，如磨砂玻璃）转为透明、点状（出现细小空隙）时，或看见培养瓶壁呈白茫状即可。

04此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。

注意事项

1、如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落（如见大量细胞片状脱落，就是消化过头了），直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，

沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性、消化时的温度以及所加胰酶量等 。