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破骨细胞如何传代

更新时间:2024-09-11      点击次数:178

破骨细胞的传代


大鼠周围血单个核细胞经RANKL、M-CSF 诱导培养2周,形成大量贴壁的多核破骨细胞后,从培养箱中取出,将培养液吸净,

加入37 ℃预温的D-Hank's液,冲洗2次,再滴加足量的0.25%胰蛋白酶液,使其覆盖整个底面,置于37 ℃培养箱中消化5min后取出,

震荡1min左右,在倒置相差显微镜下观察,当大部分细胞收缩悬起后,加入α-MEM培养液终止消化,用吸管反复抽吸吹打,

将细胞混匀后移入15ml离心管,2000r/min,离心5min,去上清,用含RANKL、M-CSF的α-MEM培养液重悬细胞, 

调整浓度至1×105个/ml,接种细胞至6孔培养板与直径35mm 培养皿中。同时对消化与贴壁过程作活细胞成像观察,3d后作TRAP染色。

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