第一步
设计你的流式细胞实验
很多同学在实验设计的时候就埋下了隐患,最常见的问题就是——对照设置不合理,最后导致整体实验失败或数据不理想。
流式对照至少有 5 种。
生物学对照,空白对照,同型对照(Isotype control),补偿对照(也叫单阳性对照)和 FMO 对照,主要目的是为了避免出现的假阳性或
假阴性结果。
第二步
细胞悬液样本制备
流式细胞术的分析检测建立在单个细胞的基础上,所以制备合格的单个分散的细胞悬液是非常关键的一环。
对不同来源和不同形式的样品,根据各种样品的特点可选择不同的分散方法。
单层培养细胞、血液、各种脱落细胞等样品
标本经过简单的制备悬液,离心分离处理,就可以得到分散较好的单个细胞悬液,是理想的流式细胞术检测对象。
不同组织来源的实体组织标本
采用酶消化法、机械法和化学试剂处理法来分散细胞。
石蜡包埋组织单细胞悬液
可使大量存档的临床资料重新得到研究与利用,从而扩大了流式细胞术的应用范围。样品制备一般通过切片、脱脂、水化、消化及终止消化后过滤再收集细胞悬液,去除碎片的单细胞悬液用 70% 乙醇固定保存。
第三步
流式检测操作流程
很多同学第一次操作流式细胞仪器的时候非常紧张,生怕哪一步做错,弄坏了上百万的实验设备。仪器的操作确实有很多讲究,比如:
「检查供液槽和废液槽:供液槽应含足够的仪器缓冲液,废液槽应在上次使用后清洗干净。
第四步
流式检测结果分析
实验结果图通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。
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