免疫组化实验过程中出现的常见问题分析

1. IHC实验结果显色过深

一抗浓度过高或孵育时间过长——降低一抗浓度或减少孵育时间

孵育温度过高——选择4℃或室温孵育

2. 实验结果存在非特异性显色

石蜡切片脱蜡不干净——延长脱蜡时间

蛋白封闭不充分——增加蛋白封闭时间

组织富含内源性生物素与过氧化物酶——使用相关试剂进行封闭

3. 实验结果显色弱或无染色

一抗浓度过低或孵育时间过短——增加一抗浓度或延长孵育时间

组织中无目的抗原的表达

一抗种属来源与二抗不匹配

注意事项

切片脱蜡和水化要充分，加反应液时要覆盖组织充分；每次加液前甩干洗涤液，同时防止干片。

一抗的冲洗原则：单独冲洗，防交叉反应污染；温柔冲洗，防止切片脱落；推荐浸洗方式。

有条件的话最好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。