葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
一、产品简介:
葡萄糖(Glucose,Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式C6H12O6,分子量为180.16,是自然界分布广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛,用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法,
上述酶学法特点是:
1、灵敏度、准确度、精密度均高;
2、使用温和的反应条件;
3、对葡萄糖有专一性,不受其他糖及还原物的干扰;
4、操作简便;
5、适用于自动分析仪。
上海雅吉生物科技有限公司登录正版葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等,其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸,同时消耗溶液中的氧,产生的过氧化氢与氧化色原物质反应生成红色的醌类化合物,初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比,分光光度计505nm进行比色测定,专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定,但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量,其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。。
二、产品组成:
名称规格 | 100ml | 存储 | |
试剂(A):酚试剂 | 100ml | RT避光 | |
试剂(B):酶试剂 | 磷酸盐、4-AAP、GOD、POD | 100ml | -20℃避光 |
临用前,酚试剂:酶试剂等比例混匀,即GOD-POD工作液,4℃保存。 | |||
试剂(C):Glu标准(5mmol/L) | 1.5ml | 4℃ | |
试剂(D):ddH2O | 1.5ml | RT | |
使用说明书 | 一份 |
三、自备材料:
1、生理盐水或PBS
2、离心管或96孔板
3、匀浆机、离心机
4、水浴锅或恒温箱
5、分光光度计、酶标仪、全自动或半自动生化分析仪
四、操作步骤(仅供参考):
1、样本处理:
①血清、血浆、脑脊液样品:从待测样品中分离出的血清或血浆不应有溶血,直接测定,如超过线性范围(30mmol/L),用生理盐水或PBS稀释后测定。
②细胞样品:
a.取适量的细胞(一般推荐>106以上),1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。b.用PBS或生理盐水清洗1~2次,1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。
c.加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复3~5次;亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心;亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min,制备好的裂解液不可离心。
③组织样品:准确称取适量组织样品,按质量(g):生理盐水或PBS(ml)=1:9的比例,加入生理盐水或PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆,2500~3000g离心10min,取上清。
2、Glu测定:
酶标仪、全自动生化分析仪Glu测定 | |||
加入物(μl) | 空白孔 | 标准孔 | 测定孔 |
ddH2O | 3 | - | - |
Glu标准(5mmol/L) | - | 3 | - |
待测样品 | - | - | 3 |
GOD-POD工作液 | 300 | 300 | 300 |
分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪Glu测定 | |||
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
ddH2O | 0.01 | - | - |
Glu标准(5mmol/L) | - | 0.01 | - |
待测样品 | - | - | 0.01 |
GOD-POD工作液 | 1 | 1 | 1 |
普通分光光度计(2ml比色杯)Glu测定 | |||
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
ddH2O | 0.02 | - | - |
Glu标准(5mmol/L) | - | 0.02 | - |
待测样品 | - | - | 0.02 |
GOD-POD工作液 | 2 | 2 | 2 |
①各种仪器按上表依次加入试剂。
②充分混匀,37℃水浴中孵育15min。
③立即用相应仪器测定505nm处吸光度,以空白孔(管)调零,读取标准孔(管)、测定孔(管)的吸光度,分别记为A标准、A测定。
机器参数:
主波长 | 505nm |
反应类型 | 终点法 |
反应方向 | 升反应(+) |
计算:Glu(mmol/L)=A测定/A标准×5
参考区间:健康成年人空腹葡萄糖:3.9~6.1mmol/L(70~110mg/dl)
备注:Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl
性能指标:
外观 | 无色至淡黄色澄清液体 |
线性范围 | 0~30mmol/L,r>0.990 |
变异系数 | 批内<2~5%,批间<5% |
空白吸光值 | <0.2(1cm光径) |
稳定性 | 密闭,6个月 |
注意事项:
1、配制好的GOD-POD工作液,4℃避光保存,1月有效;低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2、测定标本用血清或以草酸钾-氟化钠抗凝的血浆(可抑制葡萄糖的分解),可直接用于检测脑脊液中的葡萄糖含量;待测样品如不能及时测定应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3、尿葡萄糖目前多采用此法进行定量测定,但不能直接检测,需先用班氏法对尿液样品做半定量试验,按测出的大概含量,用蒸馏水稀释尿液使葡萄糖含量在3mg/ml以下,再进行检测,计算结果乘以稀释倍数即可,因为未经处理的尿液中尿酸等还原性物质的浓度较高,影响过氧化物酶反应,可能会造成结果假性偏低。
4、随着时间的延长,低浓度样品亦会显红色,所以15min后应及时检测,时间不宜过久。
5、采用酶标仪未调零情况下上海雅吉生物科技有限公司登录正版空白参考范围在0.04~0.09之间,5mmol/L标准参考范围在0.25~0.45之间,由于仪器设备、操作方法等不同,参考范围会有差异。
6、该试剂盒测定下限为0.1mmol/L,测定上限为30mmol/L;以肉眼观察,浓度≤
0.6mmol/L几乎呈无色,浓度在0.7mmol/L即可显淡红色,浓度≥2.5mmol/L可显红色,一般情况下接近上限比接近下限更准确。
7、本法线性范围可达30mmol/L,如果样品葡萄糖浓度过高,结果可能呈假性降低,应用生理盐水或PBS等稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
有效期:6个月有效。
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